蝴蝶兰的组培快繁技术_蝴蝶兰组培技术_蝴蝶兰的组培快繁技术培训

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摘要:以红龙、皇帝2个品种的蝴蝶兰花梗为材料,1/3MS培养基为基本培养基,筛选花梗使用HgCl2消毒的最佳时间,增殖培养基的最佳激素、蔗糖浓度,以确立最佳培养配方。结果表明,红龙、皇帝品种最佳的诱导材料为开过花的花梗;红龙品种的最佳消毒时间为20 min,皇帝品种的最佳消毒时间为18 min;适合红龙品种生长的最佳激素组合为5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,蔗糖浓度为25 g/L;适合皇帝品种生长的最佳激素组合为5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,蔗糖浓度为20 g/L。

基金项目:江苏省自然科学基金(编号:BK2011498、BK2010345);江苏农林职业技术学院课题。

作者简介:宋微(1978—),女,黑龙江大庆人,博士,副教授,从事植物组织培养、微生物和植物病理学研究。E-mail:[email protected]。蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)系兰科蝴蝶兰属植物,花大而美丽,花期长,品种多,栽培广泛,深受人们喜爱,在花卉市场上常常供不应求。在自然条件下,蝴蝶兰主要靠分株、种子繁殖,繁殖率低,而且由于长期进行有性繁殖,带病毒株增多,逐渐使种性降低,影响生长。如今组织培养已经成为蝴蝶兰无性繁殖最常用的方法,既可以保持母本的优良性状,快速繁殖子代,又可以反季节栽培适应市场需求[1-4]。以花梗芽作为外植体进行培养是代替蝴蝶兰茎尖培养的一种方法[1],在不影响蝴蝶兰母株的优良性状和经济条件下选取外植体,提高花梗芽的诱导率,避免病毒扩散和危害,保持母株优良的生物学特性[2]。本研究以花梗芽为外植体,筛选最佳快繁培养基,研究红龙(Phalaenopsis amabilis “Red Dragon”)、皇帝(Phalaenopsis amabilis “Emperor”)2个品种的最佳培养方案,为这2个品种的快速繁育提供必要的技术支持。

1.1材料

分别取蝴蝶兰红龙、皇帝2个品种开过花的花梗,除基部外至顶端第6节至第7节剥开可见到芽的部位为组织培养的外植体材料,每个样本100个,重复3次。

1.2方法

1.2.1清洗与消毒从温室里取出材料后用流水冲洗1 h,加入3%的洗衣粉,取生长时间超过40 d的花梗,提前把苞叶剥去后用于接种[5-7]。以75%乙醇棉球擦拭花梗表面,放在无菌操作台上备用,以节为单位切成段,每节段上端留2 cm,下端留3 cm。以解剖刀除去花梗节芽上的苞叶,去除节段表面病斑、焦枯部分[2]。以75%乙醇棉球重复擦拭去苞叶的花梗芽,力度适中,防止伤芽。以75%乙醇振荡浸泡30 s,而后以0.1% HgCl2消毒,消毒时间分别采用8、10、12、14、16、18、20 min,再以无菌水振荡冲洗3次,用解剖刀切去消毒后花梗两端各0.5 cm,以芽自然生长方向正向插入培养基内[8]。

1.2.2培养基基本培养基为1/3MS+5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+20g/L蔗糖;增殖培养基为1/3MS+7 g/L琼脂+1、2、3、4、5 mg/L 6-BA+0.1、0.2、03、0.4、0.5 mg/L NAA+5、10、15、20、25、30 g/L蔗糖,pH值为6.8。组培瓶内培养基为100 mL/瓶,分装后于121 ℃下灭菌21 min,备用。恒温26 ℃培养,光照时间为10~12 h/d,光照强度为1 600~2 000 lx。

1.3数据处理

2个品种蝴蝶兰以0.1%HgCl2消毒8 min的外植体污染率均最高,分别为76.7%、93.3%。随着消毒时间的延长,外植体污染率降低,当消毒时间延长至20 min时,红龙污染率为16.6%,皇帝污染率为16.7%,但芽同时出现毒死现象,芽死亡率为6.7%,致使萌芽率降低,所以不同品种的消毒时间存在着差异。由此可见,红龙的最佳消毒时间为20 min,皇帝的最佳消毒时间为18 min,此消毒时间根据花梗芽的饱满成熟度有所不同。

(min)污染率(%)死亡率(%)萌发率(%)红龙皇帝红龙皇帝 红龙皇帝876.693.30010.0 3.3 1073.383.30020.010.0 1263.380.00043.316.6 1450.056.60040.0 40.01643.346.60050.056.6 1826.620.00070.083.3 2016.616.70 6.7 86.6 66.6 注:培养基为1/3MS+5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+20 g/L 蔗糖。

2.2不同浓度的外源激素对花梗诱导和丛生芽产生的影响

经过40 d培养后,由表2可知,当激素组合为1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA时,红龙、皇帝平均芽长为1.56、1.92 cm,且其平均芽长随着6-BA、NAA浓度的增加而变长。当激素组合为5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA时,红花、皇帝丛生芽的平均长度达到最长,为3.04、2.67 cm。说明红龙和皇帝组培的最佳激素组合均为5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA。

激素浓度(mg/L)诱导率(%)平均芽长(cm)6-BANAA红龙皇帝红龙皇帝10.120.0a95.6a1.56a1.92a20.240.0b96.6a1.65a1.98a30.360.0b97.2a2.41b2.49b40.470.0c97.2a2.42b2.58b50.576.6d100.0b3.04c2.67c注:同列数据后不同字母表示差异显著(P<0.05)。

2.3不同蔗糖浓度对芽长和丛生芽的影响

在植物组织培养中,尤其是在蝴蝶兰快繁中,主要把蔗糖作为碳源,不同的蔗糖浓度对丛生芽的产生和芽长有很大的差异[9]。本试验对红龙和皇帝2个品种分别用5、10、15、20、25、30 g/L蔗糖进行处理,结果见表3。从表3可看出,当蔗糖浓度为25 g/L时,红龙品种的平均芽长最长,为3.0 cm,丛生芽平均个数为1.3个。当蔗糖浓度为20 g/L时,皇帝的平均芽长最长,为2.9 cm,丛生芽平均个数为2.3个。说明适合蝴蝶兰红龙、皇帝品种的最佳蔗糖浓度分别为25、20 g/L。

蝴蝶兰的花朵盛开时形似翩翩起舞的蝴蝶,因此得名。为兰科多年生常绿草本,原产于热带的气生兰,热带兰中的一个大家族,茎短,叶大,花茎一至数枚,拱形,花大,蝶状,春季开花,花期可达50-60天。蝴蝶兰因风姿绰约,美艳超群,享有“洋兰皇后”之美称,格外受到花迷的青睐,为最富有时代气息的花卉之一。如今,欧美各国对蝴蝶兰的消费量不断增加,通常高级宴会都少不了它的倩影。蝴蝶兰还是高级的切花材料,尤其是适合做新娘捧花、胸花。因此具有巨大的经济效益。

由于蝴蝶兰出生于热带雨林地区,本性喜暖畏寒。生长适温为15~20℃,冬季10C以下就会停止生长,低于5℃容易死亡。在岭南各地如要进行批量生产,必须要有防寒设施,实行保护性栽培。如果家庭小量种植,在遇冷时立即移入室内便可以安全过冬。对它的繁殖大多采用细胞组织培养,经试管育成幼苗移栽,大约经过两年左右便可开花。蝴蝶兰为单茎气生根,植株上极少发育侧枝,比其他兰花更难进行常规的无性繁殖。蝴蝶兰果实为蒴果,长形,每个果实中的种子数以万计,但种子极其细小,成粉状,肉眼不易见到。种子没有胚乳与子叶,种皮内只有发育不完全的球形胚,常规播种难以萌芽,种子离体萌发可通过在无菌条件下运用组织培养的方法进行大规模的生产育苗,以满足市场的需要。兰花的组织培养技术兴起于上世纪六十年代,本实验就是根据蝴蝶兰自身的特点,结合兰花的组织培养技术,进行种子的离体萌发、圆球茎增殖、诱导生根、炼苗、移栽的生产蝴蝶兰幼苗的思路进行初步探讨与研究的。

1 、 材料和方法10-12

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