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卡特兰的组培快繁技术培训图片

采芽的时间一般选在冬季, 此时引起褐变的物质含量低, 采芽的成活率高。不过, 并非所有品种都可如此处理, 有些品种在冬季是不长新芽的。采样时, 选取新生假球茎( 老球茎生长点多已停止发育, 且易污染) , 把新茎从母株的着生部位切下, 一边在流水中冲洗, 一边从外侧按顺序剥除叶片, 后用锋利的刀将切口和脏物削掉。消毒剂可用酒精、漂白粉等。消毒时好用有盖的瓶子, 一边消毒, 一边摇动, 减少气泡附着。消毒完后, 用无菌水冲洗材料数次, 然后按无菌操作要求取芽。取芽应选茎中间部位的大芽, 因为其成活率和生长率都比较高。取芽的方法有两种: 一种为摘出法。先将芽切下, 并将下面的切口切去少许, 然后自上轻压, 将芽压出, 如此重复1~2 次, 就可得到0 .5~1 .0 毫米的外植体( 此法需小心、熟练, 切口切得太长会切掉生长点, 过短则挤不出) ; 另一种方法是首先连苞叶进行同样的液体培养, 之后除去苞叶, 将仅附周围组织的生长点移到固体培养基上。后一种方法的成活率、萌芽率相对较高。外植体的大小, 以脱毒为目的应为0 .2~0 .3 毫米, 以增殖为目的一般取0 .4~0 .6 毫米以上,具体应根据卡特兰的类型而定。其中, BLC 系大型卡特兰茎尖可达1 .5~2. 0 毫米, SLC 系小型卡特兰茎尖可取0 .5~2. 0 毫米。

2 .初代培养

初代培养时, 可以选用的培养基有: MS+ 0 .1 毫克/ 升萘乙酸+ 10% 椰乳+ 2% 蔗糖, 或MS+ 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 1. 0 毫克/ 升萘乙酸的固体培养基, 或1/ 2MS(去除甘氨酸) + 0 .1~1. 0 毫克/ 升萘乙酸+0 .1~1. 0 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 2%蔗糖。基本培养基还可选Nitsch、B5 或卡特兰专用培养基等。天然有机物的添加, 需根据具体情况经过实验确定。培养基的pH值以5 .5~6 .0 为好。

将摘出的生长点移植到液体培养基静置培养, 培养一周后更新培养液, 3 周后移至固体培养基。初代培养的温度以15~20 ℃成活率高, 成活后25 ℃ 有利于增殖。光照多用2 000 勒连续照明。

3 .球茎的增殖和器官形成

通过初代培养的原球茎应尽早增殖为好。芽在培养基上培养2 个月后, 纵切4 块, 移至继代培养基中增殖, 以后每隔一个月分割继代一次。虽然卡特兰可在液体静置培养中增殖, 但质地比较疏松, 时间太久还会使原球体死亡。

防止办法是液体培养与固体培养交替进行, 交替时间以一个月左右效果较好。液体培养会抑制原球体分化芽, 使原球体大量增殖,转至固体培养能使之生长健壮。在芽未分化时移到液体培养基,可使芽分化受到抑制, 使原球体增殖。如此反复做液体和固体培养, 可使原球体无限增殖。但长时间( 约3 年以上)的继代培养有可能产生变异株。因此, 以生产与母株相似的幼苗为目的, 其继代应是有限的。将固体培养基上形成的原球体块一个个分离转移到液体培养基时, 切伤面应尽可能小。原球体增殖可使用如下培养基:MS( 附录表1 1) + 0 .1~5. 0 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5~1. 0 毫克/ 升萘乙酸, 或添加某些有机物如150 克/ 升香蕉, 150毫升/ 升椰乳。

当增殖到一定数量后, 便可将原球体移到成苗培养基Knudson+ 0 .18 毫克/ 升萘乙酸+ 0 .02 毫克/ 升激动素+0 .175 毫克/ 升赤霉素+ 30 克/ 升蔗糖+ 6 克/ 升琼脂上, 经1~2 个月, 所有原球茎体便可生根成苗。分化芽的幼苗也可使用MS+ 0 .1~1. 0 毫克/ 升激动素+ 1 .0~5 .0 毫克/ 升萘乙酸, 或MS+ 0 .1~5 .0 毫克/ 升激动素+ 0 .1 毫克/ 升2 , 4 二氯苯氧乙酸的培养基。

4 .壮苗培养和试管苗出瓶

当苗长至15~25 毫米时可转入壮苗培养基, 以促进茎、叶和根的生长。壮苗培养基可用总离子浓度为30~35 摩尔/ 升的基本培养基, 加香蕉5%~10%。

出瓶苗可移入装有水苔或泥炭藓、珍珠盐、蛭石混合的培养土的营养钵中, 适宜温度为15~25 ℃。此外, 需进行遮光培养, 夏季以遮光80%、冬季遮光50%为宜。

5 .褐变的产生及防止

卡特兰接种后易褐变, 成活率低。褐变是一种酚类化合物在有氧条件下被多酚氧化酶作用的结果。引起褐变的物质的量与采芽的时间和新茎的大小有关。

以卡特兰的种子为试验材料,对3种播种培养基进行试验,结果表明,花宝1号培养基对种子出苗有利,也适宜用于种子苗的继代培养。以卡特兰交配种和平×白天母的种子苗原球茎为试验材料,对4种原球茎增殖培养基进行筛选试验,结果表明,MS+4.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+3%蔗糖+6 g琼脂培养基的诱导成活率最高,能够产生大量的绿色愈伤组织,培养10周后,在愈伤组织周边出现原球茎的分化,诱导成活率50%。以大新一号、将军、和平的新梢不同节位的芽点分生组织为试验材料,用配方为MS+4.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+3%蔗糖的液体培养基进行茎尖克隆培养,每个新梢可切取5个外植体,培养7周后,3个品种均有外植体获得了绿色愈伤组织,中下节位分生组织的诱导成活率较高。

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